講述熒光檢測(cè)器的分類及特點(diǎn)
2018-05-15
[1652]
熒光檢測(cè)器的熒光涉及光的吸收和發(fā)射兩個(gè)過程，因此任何熒光化合物，都有兩種特征的光譜：激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。
激發(fā)光譜
熒光屬于光致發(fā)光，需選擇合適的激發(fā)光波長(zhǎng)(Ex)以利于檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)可通過熒光化合物的激發(fā)光譜來確定。激發(fā)光譜的具體檢測(cè)辦法是通過掃描激發(fā)單色器，使不同波長(zhǎng)的入射光激發(fā)熒光化合物，產(chǎn)生的熒光通過固定波長(zhǎng)的發(fā)射單色器，由光檢測(cè)元件檢測(cè)。zui終得到熒光強(qiáng)度對(duì)激發(fā)波長(zhǎng)的關(guān)系曲線就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線的zui大波長(zhǎng)處，處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目zui多，即所吸收的光能量也zui多，能產(chǎn)生zui強(qiáng)的熒光。當(dāng)考慮靈敏度時(shí)，測(cè)定應(yīng)選擇zui大激發(fā)波長(zhǎng)。
發(fā)射光譜
一般所說的熒光光譜，實(shí)際上僅指熒光發(fā)射光譜。它是在激發(fā)單色器波長(zhǎng)固定時(shí)，發(fā)射單色器進(jìn)行波長(zhǎng)掃描所得的熒光強(qiáng)度隨熒光波長(zhǎng)(即發(fā)射波長(zhǎng)，Em)變化的曲線。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì)，并作為熒光測(cè)定時(shí)選擇合適的測(cè)定波長(zhǎng)的依據(jù)。
另外，由于熒光測(cè)量?jī)x器的特性，使光源的能量分布、單色器的透射率和檢測(cè)器的響應(yīng)等性能會(huì)隨波長(zhǎng)而變，所以同一化合物在不同的儀器上會(huì)得到不同的光譜圖，且彼此間無類比性，這種光譜稱為表觀光譜。要使同一化合物在不同的儀器上能得到具有相同特性的熒光光譜，則需要對(duì)儀器的上述特性進(jìn)行校正。經(jīng)過校正的光譜稱為真正的熒光光譜。
激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)是熒光檢測(cè)的必要參數(shù)。選擇合適的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，對(duì)檢測(cè)的靈敏度和選擇性都很重要，尤其是可以較大程度地提高檢測(cè)靈敏度。
激發(fā)光譜
熒光屬于光致發(fā)光，需選擇合適的激發(fā)光波長(zhǎng)(Ex)以利于檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)可通過熒光化合物的激發(fā)光譜來確定。激發(fā)光譜的具體檢測(cè)辦法是通過掃描激發(fā)單色器，使不同波長(zhǎng)的入射光激發(fā)熒光化合物，產(chǎn)生的熒光通過固定波長(zhǎng)的發(fā)射單色器，由光檢測(cè)元件檢測(cè)。zui終得到熒光強(qiáng)度對(duì)激發(fā)波長(zhǎng)的關(guān)系曲線就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線的zui大波長(zhǎng)處，處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目zui多，即所吸收的光能量也zui多，能產(chǎn)生zui強(qiáng)的熒光。當(dāng)考慮靈敏度時(shí)，測(cè)定應(yīng)選擇zui大激發(fā)波長(zhǎng)。
發(fā)射光譜
一般所說的熒光光譜，實(shí)際上僅指熒光發(fā)射光譜。它是在激發(fā)單色器波長(zhǎng)固定時(shí)，發(fā)射單色器進(jìn)行波長(zhǎng)掃描所得的熒光強(qiáng)度隨熒光波長(zhǎng)(即發(fā)射波長(zhǎng)，Em)變化的曲線。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì)，并作為熒光測(cè)定時(shí)選擇合適的測(cè)定波長(zhǎng)的依據(jù)。
另外，由于熒光測(cè)量?jī)x器的特性，使光源的能量分布、單色器的透射率和檢測(cè)器的響應(yīng)等性能會(huì)隨波長(zhǎng)而變，所以同一化合物在不同的儀器上會(huì)得到不同的光譜圖，且彼此間無類比性，這種光譜稱為表觀光譜。要使同一化合物在不同的儀器上能得到具有相同特性的熒光光譜，則需要對(duì)儀器的上述特性進(jìn)行校正。經(jīng)過校正的光譜稱為真正的熒光光譜。
激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)是熒光檢測(cè)的必要參數(shù)。選擇合適的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，對(duì)檢測(cè)的靈敏度和選擇性都很重要，尤其是可以較大程度地提高檢測(cè)靈敏度。
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